ژنتیک پزشکی : تدریس فصل چهارم ژنتیک پزشکی امری (ایمری) جلسه دوم
پس به صورت کلی اینکه ابتدا DNA مورد نظر را از میزبانی هدف توسط انزیم های محدود کننده جدا میکنیم، ناقل مناسب را نیز توسط همان آنزیم می بریم، سپس DNA های به دست آمده متفاوت را باهم مخلوط میکنی تا بهم متصل شوند ، در این مرحله از انزیم لیگاز هم استفاده می شود. سپس DNA نوترکیب را وارد میزبان جدید می کنیم. حال در این مرحله باید مشخص کنیم کدام یک از میزبان هایی که DNA جدید به آنها داده شده است آنرا دریافت کرده اند. چون باید این را بدانیم تابتوانیم ارگانیسم هایی DNA مورد نظر ما را دریافت کرده اند تکثیر کنیم.💥
نحوه غربالگری ناقل ها نوترکیب:
✅غربالگری توسط ژن های شاخص
در این روش با استفاده از خاموش کردن یا اضافه کردن ژن هایی که خواص ویژه به سلول میزبان می دهند، سلول های نوترکیبی که ساختار مورد نظر را دریافت کرده اند از سایر سلول ها تشخیص می دهند. در این روش احتیاجی به این نیست که سلول هایی که را از بین ببریم تا مشخص کنیم که DNA نوترکیب وارد سلول شده است یا خیر.
در استفاده از ژن های شاخص دو بخش کاری وجود دارد، در بخش اول باید به این شکل عمل کرد که بتوان باکتری هایی که نوترکیبی در آنها رخ داده است شناسایی کرد. یعنی تشخیص بدهیم که ساختار ناقل به درون کدامیک از باکتری ها رفته است، و دوم اینکه تشخیص بدهیم باکتری هایی که ساختار ناقل را دریافت کرده اند کدامیک DNA مورد نظر ما نیز درون ناقل های آن ها وجود داشته است.
دو سیستم متفاوت به این منظور می توان تعریف کرد.
۱⃣سیتسم مبتنی بر ژن های مقاومت آنتی بیوتیکی
در این سیستم بر روی پلاسمید ژن مقاومت به آنتی بیوتیکی(آنتی بیوتیک ۱) خاص قرار داده می شود، که سلول های دریافت کننده ساختار پلاسمید به واسطه وجود این سیستم شناسایی شوند، یعنی سلول هایی که ساختار پلاسمید را دارا باشند نسبت به آنتی بیوتیک ۱ مقاوم می باشند.
همچنین درون پلاسمید ژن مقاومت به آنتی بیوتیک دیگری(آنتی بیوتیک ۲) نیز وجود دارد که محل ورود بخش DNA وارد شونده از سلول مادر درون این ژن واقع شده است (زیرا ناقل طوری طراحی شده است که با استفاده از آنزیم های محدود کننده خاص محل برش دقیقا درون این ژن باشد)، پس هرگاه DNA نوترکیب به درستی به محل تعیین شده خود وارد شود این ژن ساختارش بهم ریخته و عملکرد خود را از دست می دهد، پس سلول دریافت کننده ساختار پلاسمید به همراه DNA وارد شده به آن دیگرنسبت به آنتی بیوتیک ۲ مقاوم نمی باشد.
پس هرگاه سلول ساختار پلاسمید دارای DNA نوترکیب را دریافت کرده باشد به آنتی بیوتیک ۱ مقاوم به آنتی بیوتیک ۲ حساس می باشد.
نکته تمام مراحل بالا منوط به این است که سلول میزبان انتخاب شده نسبت از ابتدا نسبت به آنتی بیوتیک های ۱ و ۲ مقاومت نداشته باشد.
شناسایی کلنی های حساس به آنتی بیوتیک توسط سیستم رپلیکا پلیت انجام می شود، در این سیستم با استفاده از یک ابزار خاص کلنی ها بر روی یک فیلتر نیتروسلولز کپی می شوند پس از آن این کپی بر روی دو محیط کشت جدید منتقل می شود در یک محیط آنتی بیوتیک حضور دارد و در یک محیط خیر، با بررسی رشد کلنی ها بر روی هر دو محیط جدید کلنی های مقاوم به آنتی بیوتیک شناسایی می شوند، در شکل زیر این حالت کاملا مشخص می باشد.
مطالب مرتبط :
ژنتیک پزشکی : تدریس فصل چهارم ژنتیک پزشکی امری (ایمری) جلسه سوم
ژنتیک پزشکی : تدریس فصل چهارم ژنتیک پزشکی امری (ایمری) جلسه اول
کارشناسی ارشد ژنتیک انسانی در یک نگاه، تعریف، رشته های مجاز، دروس و ضرایب، منابع، زمان آزمون ۹۷-۹۶
منابع مطالعاتی کنکور کارشناسی ارشد ژنتیک انسانی
کلاس های آمادگی کنکور کارشناسی ارشد ژنتیک انسانی
در پایان به دانشجویانی که تمایل دارند از مباحثی که از ژنتیک پزشکی ایمری در کانال ژنتیک پزشکی متعلق به همین سایت تدریس می شود استفاده کنند پیشنهاد می گردد از طریق این لینک به کانال ژنتیک پزشکی بپیوندند.
